Les clés de biome sont utilisées pour ouvrir les coffres de biome dans le donjon, qui offrent accès à de puissantes armes post-Plantera, tels que les couteaux de vampire ou le pistolet arc-en-ciel. Elles n'ont qu'un très faible taux de chances de 0.04*1/2500 (0,04 %) d'être lâchées et ne sont lâchées que lorsque le joueur se trouve dans le biome correspondant à la clé (Désert, toundra, jungle, corruption, carmin ou sacré). Ainsi, il est conseillé de mettre en place une arène de farm performante pour les obtenir.
Dans les versions Console old-gen et , des moules de clé de biome seront lâchés à la place des clés de biome et nécessiteront des matériaux provenant de Plantera et des boss mécaniques afin d'être transformés en clé de biome.